PCR ანალიზატორის პრობლემების მოგვარება: ხშირად დასმული კითხვები და გადაწყვეტილებები

პოლიმერაზული ჯაჭვის რეაქციის (PCR) ანალიზატორები მოლეკულური ბიოლოგიაში არსებითი საშუალებებია, რაც მკვლევარებს საშუალებას აძლევს დნმ -ს გააძლიერონ პროგრამები, რომლებიც მოიცავს გენეტიკური კვლევებიდან კლინიკურ დიაგნოზამდე. ამასთან, ნებისმიერი რთული მოწყობილობის მსგავსად, PCR– ს ანალიზატორს შეუძლია წააწყდეს პრობლემებს, რომლებიც გავლენას ახდენს მის შესრულებაზე. ეს სტატია ეხება რამდენიმე საერთო კითხვასPCR ანალიზატორიპრობლემების მოგვარება და უზრუნველყოფს საერთო პრობლემების პრაქტიკულ გადაწყვეტილებებს.

1. რატომ არ არის ჩემი PCR რეაქცია?

მომხმარებლების ერთ -ერთი ყველაზე გავრცელებული პრობლემაა PCR რეაქციის უუნარობა სამიზნე დნმ -ის გასაუმჯობესებლად. ეს შეიძლება მიეკუთვნებოდეს რამდენიმე ფაქტორს:

არასწორი პრაიმერის დიზაინი: დარწმუნდით, რომ თქვენი პრაიმერები სპეციფიკურია სამიზნე თანმიმდევრობით და ჰქონდეთ ოპტიმალური დნობის ტემპერატურა (TM). გამოიყენეთ პროგრამული უზრუნველყოფის ინსტრუმენტები პრაიმერის დიზაინისთვის, რათა თავიდან იქნას აცილებული არასპეციფიკური სავალდებულო.

არასაკმარისი შაბლონის დნმ: დაადასტურეთ, რომ იყენებთ შაბლონის საკმარის რაოდენობას. ძალიან ცოტა გამოიწვევს სუსტი ან გამაძლიერებელი.

ნიმუშში ინჰიბიტორები: ნიმუშში დამაბინძურებლებმა შეიძლება შეაფერხონ PCR რეაქცია. განვიხილოთ თქვენი დნმ -ის გაწმენდა ან მოპოვების სხვა მეთოდის გამოყენებით.

გამოსავალი: შეამოწმეთ თქვენი პრაიმერის დიზაინი, გაზარდეთ შაბლონის კონცენტრაცია და დარწმუნდით, რომ თქვენი ნიმუში არ შეიცავს ინჰიბიტორებს.

2 რატომ არის ჩემი PCR პროდუქტი არასწორი ზომა?

თუ თქვენი PCR პროდუქტის ზომა ისე არ არის, როგორც მოსალოდნელი იყო, ეს შეიძლება მიუთითებდეს რეაქციის პირობებთან ან გამოყენებულ ინგრედიენტებთან დაკავშირებით.

არა სპეციფიკური გამაძლიერებელი: ეს შეიძლება მოხდეს იმ შემთხვევაში, თუ პრაიმერი აკავშირებს უნებლიეთ ადგილს. შეამოწმეთ პრაიმერების სპეციფიკა ისეთი ინსტრუმენტის გამოყენებით, როგორიცაა BLAST.

არასწორი ანალიზაციის ტემპერატურა: თუ ანონირების ტემპერატურა ძალიან დაბალია, შეიძლება გამოიწვიოს სპეციფიკური სავალდებულო. გრადიენტული PCR- ის მიერ ტემპერატურის ანალიზაციის ოპტიმიზაცია.

გამოსავალი: დაადასტურეთ პრაიმერის სპეციფიკა და ოპტიმიზაცია annealing ტემპერატურა PCR პროდუქტების სიზუსტის გასაუმჯობესებლად.

3. ჩემი PCR ანალიზატორი აჩვენებს შეცდომის შეტყობინებას. რა უნდა გავაკეთო?

PCR– ის ანალიზატორზე შეცდომის შეტყობინებები შეიძლება საგანგაშო იყოს, მაგრამ მათ ხშირად შეუძლიათ პოტენციური პრობლემების მოგვარება.

კალიბრაციის საკითხები: დარწმუნდით, რომ PCR ანალიზატორის სწორად დაკალიბრება ხდება. რეგულარული მოვლა და კალიბრაციის შემოწმება გადამწყვეტი მნიშვნელობა აქვს ზუსტი შედეგების მისაღებად.

პროგრამული უზრუნველყოფის ჯგუფი: ზოგჯერ, პროგრამული უზრუნველყოფის შეცდომებმა შეიძლება პრობლემები გამოიწვიოს. გადატვირთეთ კომპიუტერი და შეამოწმეთ პროგრამული უზრუნველყოფის განახლებები.

გამოსავალი: იხილეთ მომხმარებლის სახელმძღვანელო კონკრეტული შეცდომის კოდისთვის და მიჰყევით პრობლემების მოგვარების რეკომენდაციას. რეგულარულ შენარჩუნებას შეუძლია მრავალი პრობლემის თავიდან აცილება.

4 რატომ არის ჩემი PCR რეაქციის შედეგები არათანმიმდევრული?

PCR– ს არათანმიმდევრული შედეგები შეიძლება იმედგაცრუებული იყოს რამდენიმე მიზეზის გამო:

რეაგენტის ხარისხი: დარწმუნდით, რომ ყველა რეაგენტი, მათ შორის ფერმენტები, ბუფერები და DNTP, არის ახალი და მაღალი ხარისხის. ვადაგასული ან დაბინძურებული რეაგენტები შეიძლება გამოიწვიოს ცვალებადობა.

თერმული ციკლერის კალიბრაცია: ტემპერატურის არათანმიმდევრულმა პარამეტრებმა შეიძლება გავლენა მოახდინოს PCR პროცესზე. რეგულარულად შეამოწმეთ თერმული ციკლერის კალიბრაცია.

გამოსავალი: გამოიყენეთ მაღალი ხარისხის რეაგენტები და რეგულარულად დაანგარიშეთ თქვენი თერმული ციკლერი, თანმიმდევრული შედეგების უზრუნველსაყოფად.

5. როგორ გავაუმჯობესოთ PCR რეაქციის ეფექტურობა?

PCR რეაქციების ეფექტურობის გაუმჯობესებამ შეიძლება გამოიწვიოს უფრო მაღალი მოსავლიანობა და უფრო საიმედო შედეგები.

რეაქციის პირობების ოპტიმიზაცია: ექსპერიმენტი პრაიმერების, შაბლონის დნმ და MGCL2 სხვადასხვა კონცენტრაციის გამოყენებით. PCR– ს თითოეულ რეაქციას შეიძლება დასჭირდეს უნიკალური პირობები ოპტიმალური შესრულებისთვის.

გამოიყენეთ მაღალი რწმენის ფერმენტები: თუ სიზუსტე კრიტიკულია, გაითვალისწინეთ მაღალი რწმენის დნმ პოლიმერაზის გამოყენება, რათა შემცირდეს შეცდომები ამპლიფიკაციის დროს.

გამოსავალი: შეასრულეთ ოპტიმიზაციის ექსპერიმენტი, რომ იპოვოთ საუკეთესო პირობები თქვენი კონკრეტული PCR დაყენებისთვის.

მოკლედ

პრობლემების მოგვარება აPCR ანალიზატორიშეიძლება იყოს საშიში ამოცანა, მაგრამ საერთო პრობლემების გააზრებამ და მათმა გადაწყვეტილებებმა შეიძლება მნიშვნელოვნად გააძლიეროს თქვენი PCR გამოცდილება. ამ საერთო პრობლემების გადაჭრით, მკვლევარებს შეუძლიათ გააუმჯობესონ PCR შედეგები და უზრუნველყონ საიმედო შედეგები მოლეკულური ბიოლოგიის პროგრამებში. რეგულარული მოვლა, რეაგენტების ფრთხილად შერჩევა და რეაქციის პირობების ოპტიმიზაცია არის PCR– ის წარმატებული ანალიზის გასაღები.